RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。

原理是

先提取组织或细胞中的总RNA或者mRNA,在反转录酶的作用下将RNA或者mRNA反转录成cDNA

再以该cDNA第一链为模板进行PCR扩增,根据靶基因设计用于PCR扩增的基因特异的上下游引物,基因特异的上游引物与cDNA第一链退火,在Taq DNA聚合酶作用下合成cDNA第二链。

再以cDNA第一链和第二链为模板,用基因特异的上下游引物PCR扩增获得大量的cDNA。

pcr技术的原理和应用(rtpcr原理与实验操作步骤)(1)

Real-time PCR(实时荧光定量PCR)也可以缩写为RT—PCR,此外还有一个qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR ),有人可能将这三者搞混。

其实Rea-ltime-PCR和 qPCR(Quantitative Rea-ltime-PCR )都是指实时定量PCR,即在PCR进行的同时,对其过程进行实时监测,可以对起始模板数量进行精确的分析。并且国际上的约定俗成的是:RT-PCR特指反转录PCR,而Real-time PCR一般缩写为 qPCR(quantitative real-time PCR)。

RT-PCR的方法已经广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。